Análise Quantitativa de Triglicerídeos

  A análise quantitativa de triglicerídeos é realizada através de técnica espectrofotométrica, com reações totalmente enzimáticas e permite quantificar triglicerídeos em solução.
  A hidrólise dos triglicerídeos é catalisada por uma lipase para produção de glicerol e ácidos graxos livres. O glicerol gerado é fosforilado por adenosina 5’-trifosfato, em presença de glicerol quinase, resultando glicerol 3’-fosfato. O glicerol 3’-fosfato é oxidado, numa reação catalisada pela enzima L-glicerol 3’-fosfato oxidase produzindo água oxigenada. Um cromógeno vermelho é produzido por ação de peroxidase que catalisa a reação de 4-amino antipirina e 2-hidroxi-3-5-diclorobenzenosulfonato de sódio
com água oxigenada.

Reagentes:

  Reativo de cor – solução contendo lípase, ATP, glicerol quinase, glicerol 3-fosfato oxidase, 4-aminoantipirina, 2-hidroxi-3,5-diclorobenzenosulfonato e enzima peroxidase.
  Padrão de triglicerídeos – solução de trioleína 200 mg/dL.
  Amostras: soro, urina, ovo, leite.

Procedimentos e resultados:

1.   Numerar 6 tubos de ensaio e proceder conforme esquema abaixo:
2.   Homogeneizar as soluções e incubar por 15 minutos em Banho-maria a 37 C.
3.   Resfriar em água corrente.
4.   Verificar a absorbância do padrão e das amostras em 505nm de comprimento de onda, calibrando o aparelho com o tubo 1 (BRANCO).
5.   Calcular a concentração de triglicerídeos nas amostras, considerando a seguinte relação: [TRIGLICERÍDEOS] = Fator x absorbância da amostra x diluição.
  FATOR = concentração do padrão
 absorbância do padrão.
  Valores De Referência:
(soro de sangue coletado em jejum de 12 horas) = 30 a 170mg/dL.


Referência: Bioquímica A- Faculdade de Química Tecnológica.


                                 Monique Anjos